# GMP-E121, T7 RNA Polymerase, GMP Grade
mRNA作為生物大分子，可以通過體外轉錄（IVT）的方式大規模合成，T7啟動子是目前最高效的啟動子之一，因此可以利用T7 RNA聚合酶進行體外轉錄，以獲得更多的合成產物T7 RNA聚合酶是T7啟動子特異性、DNA依賴性、來自T7噬菌體的5'→3' RNA聚合酶，以雙鏈DNA為範本，轉錄與位元於T7啟動子下游的單鏈DNA互補的RNA RNA聚合酶常用於體外mRNA合成。
聚合酶為GMP級大腸桿菌生產，生產過程嚴格控制，確保最終產品不含宿主蛋白或核酸污染及其他雜質，遵循藥品生產指南，保證生產和質量控制符合GMP規範. 用於跟蹤製造過程的每一步，包括原材料採購。
產品已完成FDA DMF備案，並通過HALAL認證。
產品用途
合成單鏈RNA，用於mRNA疫苗等製備。
合成高特異性RNA探針。
合成siRNA前體。
製作RNA剪接反應（RNA splicing）的前體。
利用帽類似物合成帶帽RNA。
產品特點
對於T7啟動子有高度的特異性。
保存條件
-20±5℃
活性定義
在37℃、pH8.0 的條件下，1小時內使1nmol的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉澱物所需要的酶量定義為1個活性單位
注意事項
- Template效率和孵化時間：
- 優化的反應:
推薦的反應條件可適用於大多數Template的體外轉錄，但是，對於某些模板，可以通過延長反應時間(4小時-過夜反應)，增加範本的用量來提高產率。
- 保持RNase-free環境：
使用無RNase tube和 tips；處理含有RNA的試劑盒元件或樣品時應戴手套，並經常更換手套，特別是接觸到RNase的潛在污染源，如門把手、鋼筆、鉛筆和人體皮膚後。
不使用時，應將所有試劑密封好。在反應過程中，將所有含有RNA的試管密封。
- 在配置反應體系時，可以加入0.5 µl近岸蛋白質RNase 抑制劑（目錄號：GMP-E125），同時去掉等體積的RNase-free水。
- 由於配套10×Transcription Buffer中含有亞精胺成分，在低溫時會與Template DNA形成沉澱，配製反應液時需在常溫下進行，調整組分加樣順序，計算好體積，先加水、buffer和NTP，最後加Template和酶。
產品僅供科研或生產使用，不可直接應用於人體。
| Element | Standard |
| Appearance | Clear and transparent solution |
| Identification | Positive |
| Visible Particles | Meet the specification |
| pH | 7.5-8.5 |
| Activity | 49KU/ml-51KU/ml |
| Purity | ≥95% |
| Protein Content | Meet the specification |
| Endonuclease Residues | The degradation of substrate was ≤10% |
| Exonuclease Residues | The degradation of substrate was ≤10% |
| RNase Residues | The degradation of substrate was ≤10% |
| Bacterial Endotoxins | ＜5EU/ml |
| Exogenous DNA Residues | ≤100pg/mg |
| Host-cell Protein Residues | ≤50ppm |
| Mycoplasma | Negative |
| Heavy Metals | ≤10ppm |
| Microbial Limit | Total aerobic microbial count≤1cfu/10ml, total yeasts and |
| Cat# | Product Name |
| GMP-M062 | Vaccinia Capping Enzyme, GMP Grade |
| GMP-M072 | mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase, GMP Grade |
| GMP-M012 | E. coli Poly(A) Polymerase, GMP Grade |
| GMP-E121 | T7 RNA Polymerase, GMP Grade |
| GMP-E125 | RNase Inhibitor, GMP Grade |
| GMP-E127 | DNase I, GMP Grade |
| GMP-M036 | Pyrophosphatase, Inorganic (yeast), GMP |
| GMP-S023A | ATP, GMP Grade （100mM） |
| GMP-S023N | ATP, GMP Grade （10mM） |
| GMP-S024A | GTP, GMP Grade （100mM） |
| GMP-S024N | GTP, GMP Grade （10mM） |
| GMP-S025A | CTP, GMP Grade （100mM） |
| GMP-S026A | UTP, GMP Grade （100mM） |
<<疑難排解>>
- 質粒Template線性化時，如何選擇限制性內切酶？
帶有啟動子的質粒可以作為轉錄Template，質粒的線性化和純度會影響轉錄的產量及RNA的完整性。環狀質粒由於沒有有效的終止，會轉錄出不同長度的RNA產物，為了得到特定長度的RNA，質粒必須完全線性化，線性化的質粒需確保雙鏈為平末端或5’端為突出結構。因此需要選擇可以產生平末端或5’端為突出結構的II類限制性內切酶，並且酶的識別位點為稀有位點。
- 轉錄template的純度有要求嗎？
Template DNA應為RNaseA-Free、高純度，建議OD260/280為1.8~2.0。
- 轉錄template必須要去除嗎？
最好在轉錄結束後添加DNase I去除template。
- 轉錄產物產量低或轉錄失敗：
建議做一個對照組和一個實驗組。若對照組產量低，請聯繫近岸蛋白質技術支援。若對照組實驗產量正常但實驗組產量低，可能存在template本身的品質問題導致產量低，請嘗試以下方案解決：
a) 實驗template中有抑制反應的成分，建議重新純化template，確定template定量及其完整性；
b) 實驗template序列問題，建議延長37℃反應時間，加大template投入量或嘗試其他啟動子和RNA聚合酶。
- 短片段轉錄產物產量低：
轉錄產物小於0.3kb時，延長反應時間或增加template量可以提高RNA產量。
- 產物電泳拖尾現象：
建議重新純化Template DNA，所有實驗過程注意RNase污染控制。
- RNA產物片段大於預期
質粒Template沒有完全線性化或有義鏈3’端為突出結構，建議重新線性化質粒Template，確保線性化完全及線性化的質粒請確保雙鏈為平末端或5’端為突出結構；
RNA存在未完全變性的二級結構，更換變性膠檢測RNA產物 。
- RNA產物片段小於預期：
a) Template序列中包括類似於T7 RNA聚合酶的終止序列導致轉錄提前中止，建議更換RNA聚合酶嘗試；
b) Template中形成高級結構，建議加入SSB蛋白嘗試；
c) RNase污染。