USP《mRNA疫苗質量分析方法-指南草案》再升級，如何做出達標的mRNA？

Novoprotein 2023-06-28 15:53 發表於上海

推薦產品：mRNA原料酶鑑別試劑盒（mRNA Enzymes DIBA Kit，目錄號：PA007）

mRNA作為疫苗及藥物，最終應用於人體，生產用原材料應符合現行版《中華人民共和國藥典》相關規定和/或與國際通行要求一致。對原料進行鑑別試驗，是已知原料的確證試驗，以證實貯藏在有標籤容器中的原料是否為其所標示的原料。在mRNA的體外轉錄和修飾過程中會用到各種酶類，酶作為一種蛋白類物質，可根據《中國藥典》2020版第四部生物測定法中，免疫斑點法（Dot Immunobinding Assay，DIBA ）（通則3402）進行鑑別試驗。本試劑盒是以聚偏二氟乙烯膜(Polyvinylidene fluoride，PVDF)為固相，通過免疫斑點法進行抗原抗體反應，進行各項原料酶的鑑別試驗。

mRNA Enzymes DIBA Kit採用免疫斑點法，預先使用甲醇處理PVDF膜，目的是活化膜上的正電基團，使其更容易與帶負電的蛋白結合。將抗原吸附於PVDF膜上，利用其作為固相進行抗原抗體反應。當加入一抗後即可與膜上的抗原結合，然後再加入帶有HRP標記物的二抗，標記通過二抗和相應一抗的結合間接地交聯於PVDF膜上。最後加入標記物相應的底物，標記物即可與底物作用形成不溶性產物，呈現斑點狀著色，從而判定結果。

樣品和陽性對照出現斑點，陰性對照無斑點，可判定樣品與陽性對照結果一致，檢測樣品為目標產品。

作為病毒基因組和復制中間體的類似物，dsRNA是一種有效的病原體相關分子模式（PAMP），可以被細胞質中多個模式識別受體識別。dsRNA被識別後，會刺激大量I型乾擾素的產生，從而上調蛋白激酶R（PKR）和2ʹ-5ʹ-寡聚腺苷酸合成酶（OAS）的表達和啟動。mRNA疫苗在生產過程中存在的問題之一就是dsRNA殘留，dsRNA殘留過多，會導致mRNA疫苗的翻譯抑制和降解，進而影響疫苗最終的安全性和有效性，因此在疫苗開發過程中對dsRNA的鑑別、定性、定量和控制具有重要意義。本試劑盒是以Nylon膜為固相，通過免疫斑點法進行抗原抗體反應，進行dsRNA的定量檢測試驗。
dsRNA DIBA Kit採用免疫斑點法，將抗原吸附於Nylon膜上，利用其作為固相進行抗原抗體反應。當加入一抗後即可與膜上的抗原結合，然後再加入帶有HRP標記物的二抗，標記通過二抗和相應一抗的結合間接地交聯於Nylon膜上。最後加入標記物相應的底物，標記物即可與底物作用形成不溶性產物，呈現斑點狀著色，從而判定結果。

1-20為試劑盒Positive Control按1/2梯度上樣量結果；21-24為不同ssRNA檢測樣品分別上樣2μg和1μg結果

推薦產品：無機焦磷酸酶殘留檢測試劑盒（Pyrophosphatase, Inorganic ELISA Kit，目錄號：PA101）
在m RNA疫苗藥物的生產過程中，無機焦磷酸酶可提高mRNA產物的生成量，根據規定，需要對mRNA疫苗原液進行各項殘留檢測，其中PPase作為蛋白質品是屬於蛋白殘留檢測項範疇，因此需要對其殘留量進行定量檢測。

本試劑盒採用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）檢測PPase，可以高靈敏度、高特異性地檢測和定量分析mRNA原液中的PPase殘留。

靈敏度高：0.125ng/ml，檢測範圍0.125-8ng/ml

核糖核酸酶（Ribonuclease, RNase）在自然界中廣泛存在，即使是微量的RNase也會污染常見的分子生物學試劑，尤其會影響涉及RNA的相關實驗。因此，需要一種RNase殘留檢測試劑，可測試任何與RNA相關的溶液中是否有RNase殘留。

RNase Detection Kit提供一種方便且靈敏的螢光檢測方法，可用於檢測蛋白、核酸、試劑溶液等樣品中有無RNase。本試劑盒可同時檢測包括RNase A、RNase T1、RNase I、微球菌核酸酶、S1 核酸酶、綠豆核酸酶、Benzonase®全能核酸酶和RNase R在內的多種RNase。

R Nase Substrate是一種新型的RNase A底物，該底物一端標記有螢光基團，另一端標記有淬滅基團，淬滅基團的物理距離會將螢光基團發出的螢光抑製到極低水準。通過短波紫外線照射或在螢光計中檢測，含有RNase污染的溶液會在檢測中產生綠色螢光，而沒有RNase的溶液不會發出螢光。