從序列設計到生物學評估-NovoproteinmRNA定制化服務
Novoprotein 2023-07-06 13:42 發表於浙江
mRNA（Messenger RNA，信使RNA）是將DNA中的基因資訊傳遞到蛋白的中間信使。成功應用於新冠疫苗開發的mRNA技術，不僅是疫苗領域的技術突破，也是傳染病預防、腫瘤治療、蛋白替代療法等領域的全新研發路徑。不過，mRNA領域仍存在技術積累有限、設備和資金門檻高，知識產權限制、專業人才匱乏、成功經驗有限等問題。各類mRNA疫苗藥物申報的步伐逐步加快，藥物監管不斷規範，因此，mRNA成品的良好質量、安全性、有效性至關重要。
Novoprotein自2013年開始佈局mRNA原料酶領域，截至目前，已擁有GMP級原料產業化生產等核心技術，生產的mRNA原料，經過數十家mRNA疫苗藥物企業審計，在質量體系、生產規模、產品性能、工藝成本等方面匹配mRNA疫苗藥物申報及生產需求，為下游企業提供完善的產業鏈支援。得益於前瞻性研發和GMP大規模生產，2021年，公司mRNA原料酶及試劑居國內品牌市場佔有率第一名，優於其他國內供應商。已經成功助力兩家客戶mRNA疫苗獲國內外EUA，另支持國內多個mRNA項目處於不同的臨床階段。
公司自主建立的mRNA技術與應用平臺，依託於專業的疫苗研發、工藝開發、質量控制與保證團隊，以自有的優質酶原料和試劑為基礎，能夠提供從序列設計、基因合成、質粒與mRNA製備、LNP包封，到成品質量分析、生物學評估的全流程服務，一定程度上解決了行業客戶的痛點。截至目前，已經服務生物技術、生物製藥、人用疫苗、動物疫苗、科研院所等客戶百餘家，推動了mRNA疫苗藥物的研發和產業化進程。
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序列設計
優化序列組成原件可以提高mRNA的穩定性與翻譯效率，降低mRNA免疫原性。Novoprotein可根據實驗及項目需求，提供專業的定制化序列設計和優化服務，促進mRNA高效表達。
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包含抗原表達方案設計；免疫原性、保護表位、競爭性優勢表位分析；輔助序列、增強因數、表達標籤設計；二級結構分析與優化；修飾鹼基選擇；Cap1帽結構修飾；5' UTR與3' UTR元件文庫篩選；Poly(A)尾分段與設計等。
通過多因素的序列方案設計，最終確定核苷酸序列，用於後續mRNA合成與表達篩選。
質粒構建與生產
作為mRNA合成的重要原材料，Novoprotein具備成熟的質粒生產工藝，採用自主研發的兩步質粒純化工藝可得到高質量的質粒DNA，經過全面的質檢項目檢定，確保質粒安全放行。
質粒生產過程
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關鍵質量屬性：超螺旋比例＞ 90%
- 高通量質粒製備工藝
工藝簡潔 穩定性高
全面質量分析
符合藥典要求
mRNA生產
Novoprotein提供定制化mRNA，在提供序列優化的同時，可從基因合成開始製備mRNA，交付mRNA成品。
多種規格mRNA製備，具備科研級與GMP級mRNA生產能力，滿足科研與工業生產需求。
同批次快速合成多條mRNA，並進行表達檢測篩選，交付有表達的mRNA原液，供後續細胞功能性實驗、免疫效果評估。
客戶可對加帽方式、核苷酸修飾方式、表達標籤、質檢項進行靈活選擇和組合。
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mRNA LNP包封
Novoprotein可提供不同配方、多規格（μg-mg 級）、不同組分的mRNA 包封服務，樣品包封效率高、穩定性好、mRNA表達效果優。
LNP包封質檢項：
外觀、包封率、納米顆粒粒徑及分散係數（PDI）、Zeta電位、mRNA含量、細菌內毒素、脂質殘留、乙醇殘留、體外生物學活性。
全流程質檢服務
針對質檢檢項，可提供相應檢測報告，例如：
mRNA原料酶及試劑
Novoprotein提供mRNA原料/服務一站式解決方案，解決mRNA疫苗藥物的關鍵痛點。所有產品均採用藥用規格原輔料生產，嚴格控制宿主蛋白質殘留、核酸殘留污染，符合GMP規範的產品生產與品質管制規程，保障生產過程及所有原輔料可追溯。
產品特點：
- GMP級mRNA體外合成及修飾原料，animal-free，ampicillin-free；
- 產品生產、品質控制及配套檔體系，符合mRNA疫苗藥物研發生產需求；
- 已完成DMF備案，為中美雙報打下基礎；
- 生產工廠通過ISO“三體系”國際標準認證；
- 產品通過Halal清真認證；
- 經過上市產品使用驗證，設計年產能50億人份。
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相關產品：
| 應用 | Cat# | Product Name |
| 質粒線性化 | GMP-RE057 | BspQI, GMP Grade |
| GMP-EB057 | 10×BspQI Reaction Buffer, GMP Grade | |
| GMP-RE026 | BsaI, GMP Grade | |
| GMP-EB026 | 10×BsaI Reaction Buffer , GMP Grade | |
| GMP-RE015 | XbaI, GMP Grade | |
| GMP-EB015 | 10×XbaI Reaction Reaction Buffer, GMP Grade | |
| mRNA體外轉錄 | GMP-E121 | T7 RNA Polymerase, GMP Grade |
| GMP-EB231 | 10×Transcription Buffer, GMP Grade | |
| GMP-E125 | RNase Inhibitor, GMP Grade | |
| GMP-M036 | Pyrophosphatase, Inorganic （yeast）, GMP Grade | |
| GMP-E131 | T7 RNA Transcription Enzyme Mix, GMP Grade | |
| GMP-S023A | ATP, GMP Grade （100mM） | |
| GMP-S023N | ATP, GMP Grade （10mM） | |
| GMP-S024A | GTP, GMP Grade （100mM） | |
| GMP-S024N | GTP, GMP Grade （10mM） | |
| GMP-S025A | CTP, GMP Grade （100mM） | |
| GMP-S026A | UTP, GMP Grade （100mM） | |
| GMP-S042 | N1-Me-Pseudo UTP, GMP Grade | |
| GMP-S048 | Pseudo UTP, GMP Grade | |
| E131 | T7 High Yield RNA Transcription kit | |
| E135 | Thermostable T7 RNA Polymerase | |
| 雙鏈DNA範本去除 | GMP-E127 | DNase I, GMP Grade |
| mRNA加帽修飾 | GMP-M062 | Vaccinia Capping Enzyme, GMP Grade |
| GMP-M072 | mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase, GMP Grade | |
| GMP-EB62 | 10×Capping Reaction Buffer, GMP Grade | |
| GMP-S062 | SAM (32mM), GMP Grade | |
| M082 | Cap 1 Capping System | |
| GMP-S201 | CAP1 GAG, GMP Grade | |
| GMP-S202 | CAP1 GAG (3'OMe), GMP Grade | |
| mRNA加尾修飾 | GMP-M012 | E. coli Poly(A) Polymerase, GMP Grade |
| GMP-EB12 | 10×Poly(A) Polymerase Buffer, GMP Grade | |
| mRNA成品 | MR008/MR010 | eGFP mRNA/eGFP mRNA（N1-Me-Pseudo UTP） |
| MR009/MR011 | Luciferase mRNA/Firefly Luciferase mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) | |
| MR201 | eGFP CircRNA | |
| MR105 | mCherry mRNA（N1-Me-Pseudo UTP） | |
| MR015 | OVA mRNA（N1-Me-Pseudo UTP） | |
| MR016 | hEPO mRNA（N1-Me-Pseudo UTP） | |
| MR019 | Cas9 mRNA（ N1-Me-Pseudo UTP） | |
| mRNA加帽檢測 | CD001 | mRNA Capping Detection Sample Preparation Kit（Beads） |
| E134 | Thermostable RNase H | |
| mRNA加尾檢測 | E151 | RNase T1 |
| mRNA原料酶鑒別 | PA007 | mRNA Enzymes DIBA Kit |
| mRNA原料酶殘留檢測 | PA101 | Pyrophosphatase, Inorganic ELISA Kit |
| RNase殘留檢測 | DT007 | RNase Detection Kit |
| mRNA純化 | N243 | RNA Clean Beads |
| S125 | Lithium Chloride Precipitation Solution | |
| 無酶水 | E132 | RNase Free Water |