細胞治療研發全流程解決方案
細胞治療是指將正常或經過基因工程改造的細胞輸入患者體內，新輸入的細胞可以取代受損細胞或具有更強的免疫殺傷功能，從而達到治療疾病的目的。細胞療法在治療腫瘤（包括實體瘤和血液瘤）、糖尿病等方面顯示出越來越高的應用價值。一般來講，細胞治療包括免疫細胞治療和幹細胞治療兩大類。
免疫細胞治療中比較具有代表性的CAR-T細胞療法已經取得了顯著的進展，多款CAR-T產品已經獲得批准並上市，這些產品在治療某些類型的癌症取得了顯著的效果。此外，其他免疫細胞療法，如TCR-T、Til、CAR-NK、CAR-M等在治療實體瘤方向展示出更大的治療潛力；幹細胞治療也是一個充滿希望的領域，幹細胞具有自我更新和分化為多種細胞類型的能力，因此在再生醫學和疾病治療中具有廣泛的應用前景。目前，幹細胞治療已經在多種疾病的治療中進行了探索，包括神經系統疾病、心血管疾病、糖尿病等。
Novoprotein可提供細胞治療研發全流程解決方案，涵蓋早期發現、製程開發/規模化生產、品質控制以及體外藥效等多個階段。Novoprotein可提供符合藥物申報要求的GMP級細胞激素及抗體、GMP級Cas9蛋白、GMP級全能核酸酶、GMP級mRNA原料酶及試劑等創新原料，加速細胞治療藥物開發過程。
一、CAR候選分子發現
推薦產品：標靶蛋白/pMHC複合物
Novoprotein擁有十餘年標靶蛋白開發經驗，目前已開發600餘種標靶蛋白，涵蓋免疫檢查點、多次跨膜蛋白、pMHC複合物、ADC標靶以及CAR-T標靶等，可使用於單抗、雙抗/多抗、ADC等抗體藥物開發、功能評估、品質管制等環節。此外，Novoprotein自主研發pMHC複合物，適用於動物免疫、TCR樣抗體以及TCR篩選。
| 標靶蛋白 | pMHC複合物 |
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| Immobilized Human FMC63 at 2μg/ml (100 μl/well) can bind Human CD19-Fc (Cat#C572). The ED50 of Recombinant Human CD19-Fc (Cat#C572) is 55.28 ngant Human CD19-Fc (Cat#C572) is 55.28 ngant /ml. | 平日價 Loaded Anti-Human CD19 mAb-Fc(Cat#NC057) on AMC Biosensor, can bind Human CD19-FC (Cat#C572) with an affinity constant of 2.72 nM as determined in BLI assay. |
一、目標細胞建構
建議產品：GMP級基因編輯工具蛋白/mRNA
(1) GMP級Cas9蛋白/mRNA
利用CRISPR/Cas9系統同時破壞多個基因位點，產生的TCR(Tcellreceptor)和HLA-I(HLA classl)缺陷的CAR-T細胞可以減少移植物抗宿主疾病(GVHD)和免疫排斥反應的發生，在開發通用型CAR-T細胞時已被廣泛應用。除了產生通用的CAR-T細胞，CRISPR-Cas9技術也可以透過敲除編碼訊號分子的基因如PD1和CTLA4或編碼T細胞抑制性受體的基因來提高CAR-T細胞的功能。
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| 不同品牌Cas9蛋白細胞編輯樣本的結果分析顯示：Novoprotein的Cas9蛋白在編輯效率和敲除分數上都優於對比品牌產品。 | 將不同的Cas9/sgRNA RNP複合物以電轉的方式遞送至293T細胞, 48h後收集細胞，抽提基因組DNA，進行T7E1 檢測，檢測結果顯示：相同條件下，Novoprotein的Cas9產品的切割效率要優於對比品牌產品。 lane1：marker；lane2：Novoprotein; lane3：對比品牌B; lane4：對比品牌A；lane5：陰性對照（標靶基因片段+T7EI）；lane6：陰性對照（標靶基因片段） |
(2) GMP級PiggyBac mRNA
piggyBac轉座子最初是從昆蟲細胞分離出來的II類轉座子，透過自身編碼的轉座酶直接切割轉座子所在DNA序列，實現序列的轉移。 PiggyBac具有安全性高、操作方便（可直接用質粒轉化細胞）；載體容量大（10kb-20kb），可實現多基因的共表達等優勢，並且可透過調節轉座子質粒和輔助質粒的比例，提高外源基因的整合效率。
piggyBac mRNA是體外合成的含有piggyBac轉座酶編碼序列的線性mRNA，其編碼序列經過多重優化，經驗證，應用在人源和小鼠細胞中，轉座效率有顯著提升。此外，UTR元件的篩選和添加有助於mRNA的表達。同時也模擬具有5' Cap 1帽和3' poly(A)尾巴的成熟mRNA結構，是研究基因編輯的理想選擇。
推薦產品： GMP 級BenzoNuclease®及殘留檢測試劑盒
基於病毒載體的細胞轉導是T細胞基因轉導中最常使用的技術。在病毒載體的大規模生產純化過程中，核酸殘留成為各類質控標準的重中之重，因為DNA較穩定，容易在生產過程中形成殘留，而最終的生物製品應用到人類疾病預防和治療時，會帶來不可控的危險因子。對於病毒載體在生產過程中產生的核酸，現在大多選擇核酸酶來去除。
參考來源: Mcclure C , Cole K , Wulff P , et al, Production and Titering of Recombinant Adeno-associated ViralVectors[J]. Vis Exp,2011(57).
Novoprotein提供GMP條件下生產的全能核酸酶(BenzoNuclease®)，無動物源性，無氨芐青黴素，可高效降解單股、雙股、線性、環狀、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。品質、性能、供貨能力可靠，並已完成在美國FDA DMF申報備案，可滿足藥物申報的規範。同時提供高性能配套全能核酸酶殘留檢測試劑盒(檢測範圍0.014-10ng/ml )，靈敏度高。
| 實驗類型 | 電泳蛋白樣品製備 | 蛋白生產 | 疫苗、病毒生產 | 細胞藥物 |
| 細胞數量 | 1x 10 6細胞（10mg組織） | 1g濕重（重懸液10ml） | 1L發酵上清液 | 1L培養物 |
| 最低用量 | 125U | 250U | 100U | 100U |
| 建議用量 | 500U | 2500U | 25000U | 5000U |
三、細胞培養
建議產品：GMP級細胞激素/活化性抗體
品質保證
- Novoprotein所有GMP級產品實施GMP品質管理體系，保障物料及製程的可控性與可追溯性，並允諾可隨時配合客戶進行現場審計
- 採用無動物性材料生產及藥用輔料製劑
- 部分產品透過FDA DMF備案
- 無菌、無氨芐抗生素、無HBV、HCV、HIV等病原體、無支原體
- 內毒素低於10EU/mg、宿主蛋白殘留量低於0.005%、外源性DNA殘留量低於100pg/mg
- 高純度、高活性、高穩定性
高活性
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| Measured in a cell proliferation assay using CTLL-2 mouse cytotoxic T cells. The specific activity of Recombinant human IL-15 is ≥ 1.0 × 10 7 IU/mg. which is calibrated against human 15 /554) | The activity of GMP Human IL-15 Protein(Cat. No.:GMP-C016) was compared to another commercially available product. |
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| Three independent lots were tested for activity and plotted on the same graph to show lot-to-lot consistency of IL-7. | Three independent lots were tested for activity and plotted on the same graph to show lot-to-lot consistency of IL-4. |
| 細胞類型 | 相關的細胞激素&活化性抗體 |
| T細胞 | CD3 mAb、CD28 mAb、IL-2、IL-7、IL-15、Tscm Expender® |
| NK細胞 | CD16 mAb、NKG2D mAb、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21 |
| DC細胞 | IL-1 alpha、IL-1 beta、IL-4、GM-CSF、TNF alpha |
| MSC細胞 | bFGF、BMP-4、EGF、IGF-1、IL-6、TGF-β1、PDGF-BB |
| iPSC衍生的T細胞 | bFGF、BMP-4、FLT3L、IL-3、IL-7、SCF、VEGF |
| iPSC衍生的NK細胞 | BMP-4、FLT3L、IL-2、IL-3、IL-7、IL-15、SCF、VEGF |
| iPSC衍生的巨噬細胞 | bFGF、BMP-4、FLT3L、GM-CSF、IL-3、IL-7、IGF-1、M-CSF、SCF、VEGF |
| iPSC衍生的多巴胺能神經元/神經前驅細胞 | BDNF、FGF8、GDNF、SHH (C25II)、TGF beta3 |
| iPSC衍生的其他神經相關細胞 | 運動神經元：bFGF、BDNF、CNTF、GDNF、IGF-1、SHH 星狀細胞：Activin A、BMP-4、bFGF、 CNTF、EGF、 IGFI、NRG1Beta 神經祖細胞NPC/NSC：bFGF、NT-3 |
| iPSC衍生的心肌細胞 | Activin A、BMP-4、bFGF、DKK1、SCF、TGF-beta 1、transferrin、VEGF-A、Wnt 3a |
| iPSC衍生的胰島細胞 | Activin A、KGF |
四、品質控制
建議產品：CARTEST檢測試劑盒（CAR陽性率檢測）
流式細胞儀是細胞治療藥物研發過程中檢測CAR陽性細胞的重要技術手段，螢光標記蛋白因其預先標記了螢光素基團，可透過一步染色完成檢測，既簡化了檢測流程、節省了檢測時間，又避免了因使用二抗產生的非特異性背景，成為流式檢測CAR表現的首選試劑。
Novoprotein提供一系列定點標記的高品質螢光標靶蛋白，可維持蛋白的天然構象，不影響蛋白活性，均一性好、批間一致性高，專為特異性CAR陽性檢測而設計。
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| Bioactivity of CHO-Anti BCMA stable cell line (Cat#XCK16) and BMCA protein (Cat#CS79) was detected. 3×10 5 /test blank cells or XCK16 were incubated with BCMA (Cat#CS79) and then test binding activity. | Bioactivity of CHO-Anti BCMA stable cell line (Cat#XCK16) and FTIC-Labeled BMCA (Cat#C28SFL) was detected. 3×10 5 /test blank cells or XCK16 were incubated with FITC-Labeled BFL (CatB28 then tested for their specific binding activity. |
五、體外藥效評價
建議產品：類器官培養細胞激素&培養基
2022年9月，美國參議院無異議地一致通過了美國食品藥物管理局現代化法案（FDA Modernization Act 2.0），該法案不再強制聯邦對新藥和仿製藥進行動物試驗的要求。該法案並未完全禁止動物試驗，但它允許藥物開發商使用替代方法來研究新藥的安全性和有效性。在眾多的替代方法中，類器官因具備更接近生理細胞組成、更適合高通量篩選、操作較動物模型更簡單且週期更短等優勢，成為更有潛力頗受關注的一種有效的體外模型。
並且早在2022年8月，美國FDA首次完全基於在人類器官晶片研究中獲得的臨床前療效數據，與現有的安全性數據相結合，批准一款在研療法進入臨床試驗。這項批准沒有使用傳統動物實驗提供的測試數據。這項決定充分體現了FDA對類器官研究可信度的認可。
Novoprotein提供自主研發且經過類器官培養驗證的Activin A、BMP-4、EGF、FGF-4、FGF-10、FGFb、FGF8b、HGF、IGF1、Noggin、R-Spondin 1、Shh和Wnt3a等細胞因子，低內毒素，高活性，高批間一致性；以及腸癌，肺癌，肝癌，腎癌，腦膠質瘤等一系列經驗證的腫瘤類器官培養基，即用易操作，成功率高，專為類器官培養設計，已獲得市場認可，讓您類器官研究更可控！
| 嚴格的品質管制體系 | 經培養驗證/種類齊全 |
| 高活性：多平台活性驗證（Elisa、BLI、Cell） 高批間一致性：穩定的生產流程、嚴格的品質標準 低內毒：＜10EU/mg 高純度：SDS-PAGE&SEC-HPLC |
30餘種類 15餘種腫瘤/正常組織類器官培養基 特有類器官驗證平台，專業的技術支持 超10種驗證過的類器官模型，涵蓋小鼠正常組織、人類腫瘤組織、iPSC樣本 |
部分類器官陪樣驗證數據
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| 小鼠結腸類器官 | iPSC誘導人類小腸類器官 | 人類胰臟癌類器官 | 人類乳癌類器官 |