近岸類器官課堂-垂體瘤

本篇文章基於Cells^【2】、和Endocrine-Related Cancer^【3】中的兩篇文章，整理了人垂體瘤組織來源的類器官培養方案。

圖1. 垂體/垂體瘤類器官研究方案^【3】

細胞來源
垂體瘤活檢樣本或手術樣本
培養基配方


組織處理
1. 將新鮮垂體瘤組織樣本放入預冷的D-PBS中，剔除壞死的腫瘤組織，只選取活的腫瘤組織。
2. 將垂體瘤組織轉移到含有5 mL預冷的D-PBS溶液中清洗，去除血液和碎片。為防止污染，需要多次重複此步驟至液體變澄清。
3. 吸出D-PBS，將組織切割為1–2 mm³的小塊，此步驟可以留存適量組織用於測序、免疫組化分析等。
4. 將剩餘組織塊切碎，轉移到含有5 ml組織解離液的離心管中，輕輕震盪混勻後，放置於37℃培養箱中解離5-10min，解離期間輕輕震盪或吹打混勻。然後將組織轉移至含有5ml 組織解離液II的離心管中，放置於37℃培養箱中繼續解離5min。
5. 解離後的組織用D-PBS清洗2次後，將懸浮液經過70μm細胞篩網過濾，收集解離的細胞。
6. 將過濾的細胞懸液在4℃條件下400g離心5min，收集細胞沉澱。
7. 若細胞沉澱有明顯的紅色，則將細胞重懸於5ml的紅細胞裂解液中，冰上孵育10min使紅細胞裂解。
8. 向細胞懸液中加入5ml DMEM / F12沖洗細胞一次，離心收集細胞沉澱後，加入1-2ml DMEM / F12重懸細胞，並進行台盼藍染色和細胞計數。
類器官培養
9. 將凍存的Matrigel在4℃下過夜解凍，在冰上以3：1的體積比將Matrigel與細胞懸液混合，輕輕吹打混勻避免產生氣泡。
10. 從37℃培養箱中取出預熱的24孔板，將80μl混合液接種在各孔中，注意需接種在孔的中心，避免接觸側壁。
11. 將24孔板室溫放置5min後，轉移至37℃，5%CO₂的培養箱中孵育10min，使Matrigel固化。
12. 向每個孔中緩慢滴加500μl 預熱的類器官培養基，確保基質膠被完全覆蓋。放於37℃，5%CO₂的培養箱中培養，每2-3天更換培養基。在類器官培養15天后可以考慮繼代。


圖2. 顯微鏡下不同患者來源的HPA類器官形態及SOX2、SOX9、TACSTD2、KRT8/18、CD55、E-CAD標記物的表達均有不同程度的差異^【3】

垂體（瘤）類器官模型的建立方式
垂體（瘤）體外模型有很多種，其中作為3D模型的垂體（瘤）類器官通常是由PSCs或垂體幹細胞衍生而來的，這兩種不同來源的類器官作為研究垂體生物學的工具，各自具有優點和特定的應用範圍（表1）。垂體幹細胞衍生的類器官模型最適合於研究出生後垂體幹細胞生物學，包括表型、調節和啟動分子網路的深入表徵。然而，獲得人類正常垂體組織是非常困難的，相比之下，人垂體瘤樣本更容易從外科手術中獲得，進而培養成腫瘤類器官模型；而PSCs衍生的技術更適合於開發遺傳疾病模型^【4】。
表1.體外垂體研究模型的利弊分析^【4】

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